У больных рассеянным склерозом в стадии ремиссии при ремиттирующем типе течения заболевания отмечалось снижение общего количества CD3+ популяции лимфоцитов до 43,5±2,2% по сравнению с аналогичным показателем контрольной группы (59,3±2,1), что составляло 73% от нормы (p<0,01). Наиболее существенные изменения наблюдались при изучении уровня CD8+ (цитотоксической) субпопуляции лимфоцитов, который находился в пределах 12,4±0,8% (63% от нормы, p<0,01) Количество CD4+ хелперных клеток составило 29,0±2,1% (74% от нормы, p<0,01).
При вторично-прогрессирующем типе течения рассеянного склероза в стадии ремиссии отмечалось снижение количественных показателей Т- клеточного иммунитета, проявляющееся в уменьшении уровня зрелых CD3+ лимфоцитов на 37% (37,2±0,9%; p<0,01), CD4+ - на 44,5% (21,7±1,4; p<0,01); CD8+ - на 15% (14,2±1,6; p<0,01) по сравнению с показателями у здоровых лиц.
Соотношение CD4+/CD8+ и количество В-лимфоцитов (CD20+) в обеих группах обследованных больных не имело значимых различий по сравнению с группой здоровых лиц. При ремиттирующем типе течения заболевания соотношение CD4+/CD8+ составило 2,2±0,2, количество В-лимфоцитов – 17,4±0,2. При вторично-прогрессирующим типе течения рассеянного склероза - 1,6±0,1 и 17,2±0,4 соответственно. Анализ полученных данных показал достоверное снижение соотношения CD4+/CD8+ в группе больных с вторично-прогрессирующим РС по сравнению с группой больных с ремитирующим типом течения заболевания (p<0,002) (таблица 8).
Функциональная активность нейтрофилов в тесте восстановления нитросинего тетразолия при ремитирующем типе течения РС имела следующие
| Группы обследованных | Показатели (%) | ||||
| CD3+ | CD4+ | CD8+ | CD4+/CD8+ | CD20+ | |
| ремиттирующий РС | 43,5±2,2* | 29,0±2,1* | 12,4±0,8* | 2,2±0,2 | 17,4±0,2 |
| вторично-прогресирующий РС | 37,2±0,9* y | 21,7±1,4* y | 14,2±1,6* | 1,6±0,1x | 17,2±0,4 |
| здоровые лица | 59,3±2,1 | 39,1±1,9 | 19,6±1,8 | 1,99±0,09 | 18,4±1,6 |
Особенности: уровень базального НСТ (21,8±3,2%) увеличивался в 3,75 раза (p<0,002) по сравнению с аналогичным показателем у здоровых лиц, показатель продигиозанстимулированного НСТ (29,3±3,8%) был снижен на 40% от контрольного (p<0,002). Изменение структуры базального и продигиозанстимулированного НСТ, приводящее к снижению резервного коэффициента (1,8±0,3%; p<0,01) на 79% от нормы, свидетельствует об угнетении потенциальных ресурсов фагоцитоза в условиях стимуляции внутриклеточного метаболизма при рассеянном склерозе.
У больных с вторично-прогрессирующей формой течения заболевания особенности функциональной активности нейтрофилов как при стимуляции продигиозаном, так и без неё, заключались в менее выраженном, чем при ремиттирующем рассеянном склерозе, её угнетении, следствием чего являлось уменьшение РК на 73% от нормы (p<0,01), а не на 79% - как при ремиттирующем течении заболевания (таблица 9).
| Группы обследованных | НСТ базальный (%) | НСТ стимулир. (%) | Резервный коэффициент |
| ремиттирующий РС | 21,8±2,2* | 29,3±2,1* | 1,8±0,8** |
| вторично-прогресирующий РС | 29,4±0,9* | 49,0±1,4 | 2,3±1,6** |
| здоровые лица |
5,8±0,8 | 48,9±1,4 | 8,4±0,9 |
Дисиммуноглобулинемия при ремиттирующем типе течения рассеянного склероза проявлялась в снижении коцентрации IgG до 6,6±0,7 мг/мл (p<0,01) и увеличении концентрации IgM до 2,1±0,3 мг/мл (p<0,01). Уровень IgA составил 1,9±0,2 мг/мл и не отличался от уровня у здорового контроля.
Показатели основных классов иммуноглобулинов при вторично-прогрессирующем рассеянном склерозе практически не отличались от аналогичных показателей у больных с ремиттирущим типом течения заболевания. Концентрация IgG была снижена на 43% (7,2±0,8 мг/мл, p<0,01), IgM – увеличена на 37% (2,0±0,5 мг/мл, p<0,01), IgA –практически не отличалась от концентрации в группе здорового контроля (таблица 10).
| Группы обследованных | Показатель (мг/мл) | ||
| IgG | IgA | IgM | |
| ремиттирующий РС | 6,6±0,7* | 1,9±0,2 | 2,1±0,3* |
| вторично-прогресирующий РС | 7,2±0,8* | 2,0±0,3 | 2,0±0,5* |
| здоровые лица | 12,6±0,3 | 1,9±0,2 | 1,3±0,2 |
Изменения количественных показателей иммунитета при ремиттирующем рассеянном склерозе сопровождались гиперчувствительностью иммунокомпетентных клеток к исследуемым нейроспецифическим антигенам. Наиболее выраженная степень сенсибилизации отмечена к основному белку миелина (ИА=0,60±0,06; p<0,01), что свидетельствует о разрушении оболочек аксона и глиальных клеток, продуцирующих миелин. В меньшей степени нейросенсибилизация отмечена к белку S-100 (ИА=0,67±0,05), антигену нейрональных мембран (ИА=0,650,05; p<0,01) и галактоцереброзидам-С I типа (ИА=0,68±0,07; p<0,01). При вторично-прогрессирующем типе течения рассеянного склероза наиболее выраженная степень сенсибилизации также отмечена к основному белку миелина (ИА=0,56±0,08; p<0,01), наименее – к белку S-100 (ИА=0,60±0,04; p<0,01), антигену нейрональных мембран (ИА=0,62±0,06; p<0,01) и галактоцереброзидам-С I типа (ИА=0,63±0,08; p<0,01) (таблица 11).
| Группы обследованных | Показатели (ИА) | |||
| S-100 | АНМ | ОБМ | ГЦ С Iтипа | |
| ремиттирующий РС | 0,67±0,05 | 0,65±0,05* | 0,60±0,06* | 0,68±0,07* |
| вторично-прогресирующий РС | 0,60±0,04* | 0,62±0,06* | 0,56±0,08* | 0,63±0,08* |
| здоровые лица | 0,78±0,05 | 0,81±0,03 | 0,80±0,04 | 0,84±0,03 |
Кроме того, при ремитирующем типе течения рассеянного склероза установлены прямые корреляции между индексами адгезии лимфоцитов в присутствии антигена нейрональных мембран и общего белка миелина (R=0,39; p<0,02) (рис.1), а также между индексами адгезии лимфоцитов в присутствии белка S-100 и галактоцереброзидов-С I типа (R=0,44; p<0,04) (рис.2).
рис. 1.
рис. 2.
прямая корреляция между индексами адгезии лимфоцитов в присутствии антигена нейрональных мембран и галактоцереброзидов-С I типа (R=0,60, p<0,02) (рис.3).
рис. 3.
При изучении цитокинового статуса пациентов с ремиттирующим типом течения рассеянного склероза наиболее существенные изменения наблюдались при определении сывороточного уровня провоспалительного цитокина ИНФ-гамма, который находился в пределах 150,02±10,09 пг/мл, что превышало показатели контрольной группы на 248% (p<0,001). Содержание в сыворотке других провоспалительных цитокинов, в том числе ФНО-альфа, ИЛ-6 и ИЛ-8 составило 126,9±10,4 пг/мл (на 243% выше нормы, p<0,001), 17,5±1,1 пг/мл (в пределах нормы) и 67,6±8,6 пг/мл (на 83% выше нормы, p<0,01) соответственно. Сывороточный уровень противовоспалительного цитокина ИЛ-4 практически не отличался от аналогичного показателя контрольной группы и составил 34,7±6,6 пг/мл.
При вторично-прогрессирующем типе течения рассеянного склероза также отмечалось повышение сывороточного уровня провоспалительных цитокинов: ИНФ-гамма (до 222.4±28,6 пг/мл, на 416% по сравнению с группой здорового контроля; p<0,001), ФНО-альфа (до 149,4±18,2 пг/мл, на 302% от нормы; p<0,001) и ИЛ-8 (до 84,2±9,4 пг/мл, на 127% от нормы; p<0,002). Содержание в сыворотке провоспалительного цитокина ИЛ-6 и противовоспалительного цитокина ИЛ-4 составило 18,8±0,9 пг/мл и 38,2±6,2 пг/мл соответственно и не отличалось от показателей у здоровых лиц. Кроме того, в группах обследованных больных наблюдалось достоверное отличие в содержании провоспалительного цитокина ИНФ-гамма (p<0,02) (таблица 12).
| Показатели (пг/мл) | Группы обследованных | ||
| ремиттирующий РС | вторично-прогресирующий РС | здоровые лица | |
| ИНФ-гамма | 150,02±10,09*** | 222,4±28,6*** x | 42,54±8,27 |
| ФНО-альфа | 126,9±10,4*** | 149,4±18,2*** | 37,28±7,32 |
| ИЛ-8 | 67,6±8,6* | 84,2±9,4** | 36,7±7,1 |
| ИЛ-6 | 17,5±1,1 | 18,8±0,9 | 19,4±1,3 |
| ИЛ-4 | 34,7±6,6 | 38,2±6,2 | 25,4±5,7 |
Таким образом, при исследовании иммунологической реактивности обнаружен Т-клеточный дефицит как в группе больных с ремитирующим типом течения рассеянного склероза, так и в группе больных с вторично-прогрессирующим типом течения заболевания. Изменений В- клеточного звена иммунитета в обеих группах обследуемых больных установлено не было. Дисиммуноглобулинемия выражалась в снижении концентрации IgG и повышении концентрации IgM также в обеих группах обследуемых больных, что согласуется с данными, полученными Odinak MM. et al (2001); Killestein J. et al (2001).
Изучение функциональной активности нейтрофилов в тесте восстановления нитросинего тетразолия, характеризующего состояние метаболического звена, с которым связаны функции нейтрофилов, выявило её угнетение в обеих группах больных. Обнаружено увеличение показателей базального НСТ, отражающего уровень продукции нейтрофилами супероксидного аниона и степень функционального раздражения клеток in vivo. Зарегистрировано изменение структуры базального и продигиозанстимулированного показателей, приводящее к снижению резервного коэффициента, что позволяет предположить угнетение потенциальных ресурсов фагоцитоза в условиях стимуляции внутриклеточного метаболизма.
Изменения клеточного и гуморального звеньев иммунитета сопровождались гиперчувствительностью лимфоцитов к исследуемым нейроспецифическим антигенам.
В работе использована методика тестирования адгезивной активности лейкоцитов в присутствии мозгоспецифических антигенов. Установлено наличие гиперчувствительности лимфоцитов к исследуемым антигенам, причём индекс адгезии с основным белком миелина уменьшался в большей степени, особенно при вторично-прорессирующем типе течения заболевания, чем в реакции с белком S-100, антигеном нейрональных мембран и галактоцереброзидами С-Iтипа. Полученные данные подтверждают факт нарушения гематоэнцефалического барьера, сопровождающегося выходом в кровь мозгоспецифических антигенов, и свидетельствуют о различиях патогенетического вклада повреждения глии и нейронов в развитии нейроиммунологических нарушений при рассеянном склерозе. Можно полагать, что повышенная чувствительность иммунной системы к нейроантигенам отражает степень индукции синтеза нейроантител, обусловленного деструктивным повреждением мозга. При рассеянном склерозе биологический смысл аутоантигенных свойств ткани мозга, вероятно, заключается в реализации иммунологической реакции на нарушение гематоэнцефалического барьера (Столяров И.Д., 1996). Нейроантитела, по-видимому, связывают элементы деструкции мозга и могут способствовать их элиминации из организма. Однако, проходя через нарушенный барьер в ткани мозга и взаимодействуя с повреждёнными нейрональными стуктурами, эти антитела могут усиливать патологический процесс в ЦНС и, тем самым, потенциировать дизрегуляцию функций иммунной системы. Патофизиологические механизмы патологии нервной регуляции иммунологических реакций в таком случае, по мнению Крыжановского Г.Н. и Магаевой С.В. (1997), связаны с формированием генератора патологически усиленного возбуждения или повреждением нейронов, приводящим к гипоактивности, утрате специфических функций и гибели нейронов с последующей дезинтеграцией нейроиммунорегуляторного аппарата в целом.
Выявление сенсибилизированных к нейроспецифическим антигенам иммуноцитов подчёркивает значение нарушений клеточного и гуморального иммунитета в патогенезе рассеянного склероза и роль нейроиммунопатологического процесса при данном заболевании. Кроме того, при ремиттирующем типе течения рассеянного склероза установлена прямая зависимость между степенью сенсибилизации лимфоцитов к антигену нейрональных мембран и к основному белку миелина, а также между степенью сенсибилизации лимфоцитов к белку S-100 и к галактоцереброзидам-С I типа. При вторично-прогрессирующем рассеянном склерозе установлена прямая зависимость между степенью сенсибилизации лимфоцитов к антигену нейрональных мембран и к галактоцереброзидам-С I типа. Исследуя цитокиновый статус пациентов с рассеянным склерозом, отмечено повышение сывороточного уровня провоспалительных цитокинов: ИНФ-гамма, ФНО-альфа и ИЛ-8 по сравнению с группой здорового контроля. Подобные данные отмечают в своих работах Drulovic J. et al, (1998); Huang Y.M. et al, (1999); Ozenci V. et al, (2000).
